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聚丙烯酰胺功能配基的選擇與制備

發布日期:2015-07-04 17:14:50

聚丙烯酰胺功能配基的選擇與制備

在基質上負載特定的功能配基,才能與目標物進行特異性吸附作 用。常用擴張床基質的骨架材料為碳水化合物,含有豐富的羥基,具有特異性的功能配 基通過與羥基作用,負載到基質上,完成對羥基的修飾和改造。由于羥基的化學活性較 弱,故應先將其活化。羥基活化劑一般為含有雙鍵和環氧基的雙官能團化合物,如烯丙基溴、環氧氯丙烷、二乙烯基砜等,羥基的活化反應過程所示。 經活化的基質可較容易地與功能配基發生偶聯,從而制備出性能各異的功能化介質通過反相懸浮發制備得到的基質一般不具有特異性吸附位點,故不可直接作為擴張 床介質使用,而是需要。

傳統的擴張床介質主要有親和介質、離子交換介質等。近年來,學者們又開發出多 種模式的介質,如疏水性電荷誘導層析介質、混合模式介質等等。
疏水性電荷誘導層析介質是一種新型的擴張床介質,它結合了親和作用、靜電相互作用、 疏水相互作用、偶極相互作用等多種分子間的作用力,特別適合于抗體分離。功能 配基可通過親和作用及疏水作用與抗體保守區域中的Fc片段特異性結合,當溶液的pH 下降時,靜電作用會使抗體從功能配基上解離出來,其機理所示。由于HCIC 配基和抗體中Fc片段的親和作用,故可通過基因重組的方式來設計出含有Fc片段的融 合蛋白,從而簡化蛋白分離步驟,提高分離效率。
混合模式層析介質的功能配基多含有疏水性基團(如烷基、苯環等)和親水性基團 (如羧基、氨基等),在不同條件下可以不同方式作用于目標分子,其機理 所示。當離子強度較低時,蛋白質會通過離子交換作用吸附在功能配基的親水性基團周 圍;當離子強度較高時,蛋白質外層電荷會被鹽離子屏蔽,使蛋白質表現出明顯的疏水 性,從而與功能配基的疏水性基團結合?;旌夏J浇橘|的配基不僅受離子強度影響,還 受pH影響,因此可以調節的參數較離子交換介質的多,使用起來靈活性大,特別適用于 從復雜料液中分離出目標產物。
各種新型作用模式介質的產生,使擴張床在生物質分離中的應用更加廣泛。隨著人 們對于分子間作用力不斷深入的了解,更多不同作用模式的介質將會被設計和開發出來, 這對提高擴張床的分離效率有著重要的意義。