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聚丙烯酰胺擴張床基質的制備及性質研究

發布日期:2015-06-12 17:37:11
擴張床吸附技術集固液分離、富集濃縮、初期純化于一個單元操作中,是一種高效 的集成化分離技術,而擴張床基質則是實現吸附操作的關鍵。本文研制了兩種新型的擴 張床基質,并對其制備過程的工藝條件、在擴張床中的流體力學性質和吸附性能進行了 考察。主要包括以下四方面的內容:
第一,木薯淀粉擴孔法制備聚丙烯酰胺凝膠微球擴張床基質。以丙烯酰胺為主原料, 碳化鎢(TuC)為增重劑,N,N’-亞甲基雙丙烯酰胺(MBAAm)為交聯劑,木薯淀粉為 增稠劑和致孔劑,食用油為連續相,Span-80為分散劑,采用反相懸浮法制備了聚丙烯酰 胺-碳化鎢(pAAm-TuC)凝膠微球基質,其中木薯淀粉的使用既解決了單體丙烯酸黏度 低無法包裹增重劑的缺陷,又實現了擴張床層析介質大孔的需要,解決了聚丙烯酰胺無 法包埋增重劑制成擴張床介質的難點。通過對微球制備工藝過程中各關鍵參數的研究, 得到優化后的工藝條件為:環己烷與食用油按質量比1:2混合組成油相;分散劑Span-80 的質量占油相質量3.0%;油相和水相的質量比4:1;攪拌轉速為450rpm。制備所得的凝 膠基質具有規則的球形外觀,其粒徑分布為50>400^m。通過對微球物理性質、孔結構、 機械強度等性質的考察,結果表明pAAm-TuC凝膠基質的粒徑呈對數正態分布,擴孔后 微球的平均孔徑700-1000mn之間,增大碳化鎢的量,基質的密度顯著提高,迗到1.4g/cm3 左右,且其機械強度也相應提高。
第二,晶膠溶劑致孔法制備聚丙烯酰胺晶膠微球擴張床基質。采用晶膠溶劑致孔法, 通過反相懸浮聚合,制備得到了 pAAm-TuC晶膠微球基質。通過對微球制備工藝過程中 各關鍵參數的研究,得到優化后的工藝條件為:單體及交聯劑的質量占水相質量的7%; 晶膠反應的冷卻溫度在-12°C時微球的孔徑最大;連續相和分散相的質量比為4:1;攪拌 轉速為550rpm。制備所得的晶肢基質也具有良好的球形度,其粒徑分布均在50~400(mi 之間,且具有超大孔結構,平均孔徑均在3(Hun左右。測定了晶膠基質的物理性質、孔 結構和機械強度等基本性質,結果表明pAAm-TuC晶膠基質的粒徑呈對數正態分布,添 加碳化鎢質量與單體質量的比例從25%增加到100%時,微球的濕真密度從1.12 g/cm3上 升到1.40g/cm3。另外,碳化鎢的用量對晶膠基質粒徑分布及孔結構的影響較小,說明丙 烯酰胺聚合物骨架結構并未發生明顯的變化,但晶膠基質的機械強度在添加碳化鎢后有 所提高。
第三,pAAm-TuC凝膠基質與pAAm-TuC晶膠基質在擴張床中的流體力學性質。分 別測定了第二章與第三章中制得的具有較高密度(1.4g/cm3左右)的pAAm-TuC凝肢基 質與pAAm-TuC晶膠基質在擴張床中的擴張性質及流體力學性質,同時引入各參數和關 聯式對實驗結果進行討論。實驗結果表明,兩種微球均可在擴張床中進行操作,相同流 速下,pAAm-TuC凝膠基質的擴張率較小,值較大,和值則較小,說明凝 膠基質在擴張床中表現相對較好。
第四,pAAm-TuC-AMPSA凝肢介質與pAAm-TuC-AMPSA晶膠介質吸附蛋白質的 性能。分別以第二章與第三章中制得的具有較高密度(1.4g/cm3左右)的pAAm-TuC凝 膠微球和pAAm-TuC晶膠微球為基質,接枝AMPSA制備出陽離子交換 pAAm-TuC-AMPSA凝膠介質和pAAm-TuC-AMPSA晶膠介質,并對接枝前后的微球對 蛋白質(以溶菌酶為摸型蛋白)的吸附性能進行了研究和比較。實驗結果表明,接枝 AMPSA后,微球對溶菌酶的吸附率明顯變大,且pAAm-TuC-AMPSA晶膠介質對溶菌酶 的吸附率較高,迗到56.5%,吸附容量為56.5mg/g,說明在蛋白質吸附性能方面,晶膠 介質的表現較佳。
本文圍繞pAAm-TuC基質,開展了基質制備與基本性質測定、流體力學性質測定、 功能化及蛋白質吸附性能測定等方面的研究,制備出了兩種新型的擴張床基質,為擴張 床分離技術提供了新的基質材料。
生物分離屬于生物下游過程技術,也是生物技術產業中的瓶頸之一。生物技術產品 具有多樣性、易變性和復雜性,故其在分離過程中的難度較大。將分離技術集成化,可 縮短操作流程、減小過程能耗、提高產品收率[1]。擴張床吸附(ExpandedBedAdsorption, EBA)技術就是一種集成化的分離技術,它集固液分離、富集濃縮和初期純化于一個新 的單元操作中,可直接從發酵液或細胞勻漿中獲得目標產物[2]。
性能優良的擴張床介質是層析過程的關鍵,直接影響著分離過程的傳質和分離效率, 需進行特殊設計。聚丙締酰胺(polyacrylamide, pAAm)微球具有親水性好,在pHl-10 的范圍內穩定性好,彈性好,連通性好,復原能力強等優點,且不為生物降解,有一定 機械強度,近年來備受關注。pAAm反相懸浮聚合微球已經廣泛用于生物分離、血液凈 化、免疫診斷和藥物緩釋等領域13"6:1。已經制備成多種商用層析介質,用于固定床層析分 離,但是至今未見制成擴張床層析介質的報道,更無商品介質。因此,本文關注的重點 將是以pAAm為骨架,設計和開發出新型的擴張床介質的基質,并研究其在擴張床中的 性質。